Summary
중증 급성 췌장염의 마우스 모델은 본원에 기재된다. 여기에 제시된 절차는 매우 빠르고 간단하며 접근 가능하므로 잠재적으로 분자 메커니즘및 급성 췌장염의 다른 치료 내정간섭에 대한 연구가 편리한 방법으로 허용됩니다.
Abstract
급성 췌장염의 보급 (AP), 특히 심한 급성 췌장염 (SAP), 매년 젊은 연령 그룹에서 증가. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료의 부족이 있다. 형질 전환 및 녹아웃 균주의 쉬운 접근성과 생체 내 평가에 필요한 약물의 최소 용량을 허용하는 작은 크기로, 마우스에서 잘 확립 된 실험 모델은 AP 연구에 선호됩니다. 더욱이, 타우로콜레이트 나트륨(TC)을 통해 유도된 SAP는 현재 가장 널리 사용되고 가장 잘 특징적인 모델 중 하나입니다. 이 모형은 AP의 프로세스 도중 새로운 치료 및 가능한 분자 사건을 위해 조사되었습니다. 여기서는 타우로콜레이트 나트륨과 간단한 수제 현미경을 이용한 AP 마우스 모델의 생성을 소개합니다. 또한, 우리는 또한 후속 조직학 및 세로가지 시험을 위한 방법론을 제공합니다.
Introduction
급성 췌장염 (AP)은 비정상적으로 활성화 된 효소에 의해 후속 덕트 팽창 및 췌장 자가 소화를 가진 주요 췌장 덕트의 방해를 특징으로하는 췌장의 급성 염증입니다. 그것의 임상 표현은 현지 또는 전신 염증, 복통 및 혈청 아밀라세1,2의 고도를 포함합니다. 심각도 분류3에 따르면 AP는 경미하고, 온건하고, 심한 형태로 존재할 수 있으며, 그 중 심각한 급성 췌장염(SAP)은 30%4 이상의 높은 사망률로 인해 가장 심각한 급성 췌장염(SAP)이 가장 우려되는 상태입니다. 미국에서 AP는 200,000명 이상의 환자에 영향을 미치는 입원의 가장 흔한 이유 중 하나입니다5. 더욱이 AP, 특히 SAP는 매년 증가하고 젊은 연령집단에 영향을 미치고 있다6. 그러나, 현재 임상 실습에 효과적인 치료 옵션의 부족이있다6,7. 따라서 AP에 관련된 분자 메커니즘을 탐구하여 치료 개선을 촉진할 필요가 있습니다.
잘 확립 된 실험 동물 모델은 AP에 관련된 메커니즘을 연구하고 다른 치료 양식의 효과를 평가하기 위해 필요합니다. 형질 전환 및 녹아웃 균주의 쉬운 접근성과 생체 내 평가에 필요한 약물의 용량을 최소화하는 작은 크기로, 마우스는 AP 연구에 선호됩니다. 따라서, AP의 몇몇 모형은 마우스8,9에서 개발되었습니다.
caeruleinin10의 정맥 투여를 통해 유도된 온화한 췌장염 쥐 모델에서 작업한 Niederau et al.은 동일한 약물 및 주사 경로를 사용하여 유도된 아시나르 세포 괴사로 제시된 SAP 마우스 모델을 개발했다. 이 모델은 비침습성, 신속한 유도, 넓은 재현성 및 적용가능성을 포함한 몇 가지 장점을 가지고 있지만, 가장 큰 단점은 대부분의 경우 온화한 형태의 AP만이 개발되어 임상 관련성을 제한한다는 것입니다. 알코올은 AP의 주요 과인자 중 하나로 간주됩니다. 그러나, Foitzik 외. 외는 외크림 과자극12와 같은 그밖 요인과 결합될 때만 췌장 상해를 일으키는 원인이 된다는 것을 보고했습니다. 더욱이, 알콜 유도 AP 모형은 다른 행정 경로를 통해 개발되고, 약 복용량이 보고되고 있더라도, 그들의 주요 단점은 그(것)들을 재생하는 어려움입니다. L-아르기닌의 복막 투여는 마우스16에서 AP를 유도할 수 있다; 그러나, 그것의 낮은 임상 관련성은 그것의 응용프로그램을 방해합니다. 황소 자리, 담즙 소금, 먼저 췌장 덕트 주입을 통해 인간의 AP를 닮은 조건을 유도하기 위한 1965 년에 Creutzfeld 외. 에 의해 제안 되었다17. 병리학학18,19의 임상 관련성에 관한 논쟁이 존재하지만, 타우로콜린성 유도 췌장염은 SAP에 필수적인 모델로 남아 있습니다.
이 모델은 실현하기 쉽고 마우스에도 효과적이기 때문에, 이제 생체 내 연구에서 작은 동물을 위한 가장 많이 사용되는 AP 모델 중 하나입니다. Perides 외. 마우스20에서 SAP를 유도하기 위해 타우로콜레이트 나트륨(TC)을 고용하여 병리학을 이해하는 통찰력을 제공했습니다. 유전자 변형 기술과 결합된 이 모델은 AP에 관련된 몇 가지 특정 유전자를 확인할 수 있게 되었습니다. 예를 들어, Bicozo 외. CD38 유전자의 녹아웃은 TC-주입 췌장염의 모델에 대하여 보호되고 세포내 Ca2+ signaling21에 있는 변경에 기계장치를 기인한다는 것을 보여주었습니다. Fanczal 외. 마우스 췌장 아시나르 및 덕트 세포의 혈장 막에서 TRPM2 발현의 생리적 의미를 조사하고 TRPM2 녹아웃 mice22에서 TC 유도 SAP의 감소된 심각도를 입증하였다. 또한,이 모델은 또한 생체 내에서 많은 새로운 약물을 테스트하는 간단하고 효과적인 방법을 제공합니다. 예를 들어, 이 방법은 카페인23, 탈수성산24 및 다양한 항산화제 및 항응고제25,26의 치료 효과를 검증가능하게 하였다. 이 증거는 TC 유도 SAP 모델의 다재다능함을 보여줍니다. Wittel 외는 유사한 마우스 모델을 설명했지만27, 구현 절차에 대한 세부 사항의 부족은 결과를 재현 할 수없는 발생할 수 있습니다. 이 기사에서는 간단한 수제 현미경을 이용한 방법에 초점을 맞추고 TC 유도 SAP를 연구하여 AP의 발병 및 치료에 대한 추가 연구뿐만 아니라 다른 많은 물질에 완벽하게 적응할 수 있는 실험 방법을 위한 가능한 지침을 제공합니다.
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Protocol
동물과 관련된 모든 실험은 소오하우 대학의 동물 윤리위원회의 승인을 받았습니다. 모든 수술 절차는 완전한 마취하에 수행되었습니다. 진통제는 이전 문학에 따라 질병의 자연적인 과정에 간섭을 피하기 위하여 이용되지 않았습니다28,29. 진통제의 부족에 대한 승인은 또한 소오하우 대학의 동물 윤리위원회에 의해 부여되었다.
1. 준비
- 수술 전 C57BL/6 야생형 마우스 8-12h를 빠르게 합니다.
- 5% (w/v) TC 용액(93mMM)을 0.9%의 염화나트륨으로 희석한다. 0.22 μm 필터를 통해 용액을 필터링합니다.
- 30분 동안 121°C의 온도에서 압력 멸균기를 사용하여 집게, 가위, 블레이드 홀더, 바늘 홀더, 혈전 성 클립, 혈관 클램프 및 멸균 드레이프를 포함한 수술 기구 및 재료를 자동 클랩합니다.
- 수제 마이크로시링을 준비합니다. 이렇게 하려면 일회용 인슐린 팁과 25 μL 플랫 팁 마이크로리터 주사기에 장기간 플라스틱 파이펫 팁을 수동으로 설치합니다. 조사를 통해 살균.
2. 마취 및 수술 전 준비
- 6-8주 된 남성 C57BL/6 야생형 마우스(약 21-23g)의 무게. 50 mg/kg의 용량으로 1% 펜토바르비탈 나트륨 용액의 관면 주사로 전신 마취를 유도하십시오.
- 테이프와 함께 마취폼 플랫 플레이트의 수핀 위치에 마우스를 고정합니다.
- 각 동물의 작동 영역을 시포이트 공정 수준에서 하향 조정하여 양측 전방 우수 일강 척추의 연결 선까지, 좌우면은 전방 축균선과 평행하게 결합하여 준비한다.
- 외과 적 부위와 외과 의사의 전면에 준비된 영역으로 구성된 외과 적 부위에 중점을 둔 멸균 수술장을 준비하십시오.
- 벤치탑을 소독합니다.
- 수술 스크럽 솔루션의 여러 응용 프로그램으로 절개 부위를 청소하십시오. 0.5%의 요오도프기로 2~3회 피부를 닦아 매번 1-2분 동안 건조시키십시오.
- 멸균 커튼으로 마우스를 덮습니다.
3. 외과 적 절차
참고: 도 1 은 마이크로 주입에 의한 이중 성 원각 덕트에 TC의 역행 주입 전후에 마우스 췌장의 해부학 및 형태학을 묘사합니다.
- 약 2 ~ 3cm 길이의 중앙위부 절개를 합니다.
- 위장을 따라 십이지장(duodenum)을 왼쪽에서 오른쪽으로 찾습니다. 십이지장과 왼쪽을 외과 용 집게와 소독제에 젖은 면봉을 사용하여 췌장, 이중 성 덕트 및 십이지장 유두를 부드럽게 당깁니다. 장 벽이나 관련 선박을 손상시키지 않도록주의하십시오.
- 8-0 사용 유두 주위의 십이지장과 췌장 사이의 연결을 통과하고 마우스 몸의 왼쪽으로 당겨 십이지장을 고치도록 봉합사.
- 피부와 간 의 아래 쪽 가장자리를 부드럽게 당깁니다. 일반적인 간 덕트를 고정하여 포털 정맥이나 췌장을 고정하지 않도록 하십시오. 근위 이중성 덕트를 고정합니다.
- 소인주사를 분해 성 빌리오판크레아틱 덕트로 역행하여 관통합니다. 십이지성 유두 근처의 바늘 끝을 클램프로 고정합니다. 5 μL/min의 속도로 췌장 덕트에 5% TC의 10 μL을 주입합니다.
- 안정적인 압력을 달성하기 위해 5 분 동안 비오 판크레틱 덕트를 닫습니다. 그런 다음 마이크로 인젝터를 꺼내 클램프를 제거합니다.
- 십이지드넘을 원래 해부학적 위치로 복원하고 출혈을 확인합니다.
- 6-0 봉합사로 상처를 닫고 0.5 %의 요오도프로 소독하십시오.
4. 복구 및 수술 후 관리
- 37°C 열패드에서 마취에서 동물을 회수합니다. 모든 동물이 깨어날 때까지 수술 후 수술 후 방에 수술 된 동물을 보내지 마십시오.
- 0.8 mL의 식염수 피하 및 천천히 유체 보충제를 투여하십시오.
- 그들의 일반적인 상태 및 감염 또는 질병의 표시에 대 한 수술 후 동물을 모니터링.
5. 세로지학적 시험 및 적법평가
- 에서 24 수술 후, 동일한 복용량 및 주입 경로를 사용 하 여 pentobarbital 나트륨으로 쥐를 마취.
- 복부 대어타 (마우스 당 약 0.8 mL)에서 모든 혈액을 수집하고 추가 테스트를 위해 혈청을 분리하기 위해 1,500 x g 에서 15 분 동안 회전합니다.
- 췌장 조직을 수집합니다.
- 흉부 구멍을 열어 폐 조직을 수집합니다.
- 아밀라제, 리파제, 간 기능(알라닌 트랜스아미나아제(ALT) 및 아스파르타트 트랜스아미나아제(AST) 및 신장 기능(urea 및 creatine)을 포함한 혈청의 생화학 기능 지수를 제조업체의 지침에 따라 상용 키트를 사용하여 측정합니다.
- 폐와 췌장 조직을 균질화하고 제조업체의 지침에 따라 상용 키트를 사용하여 골수페록시다아제 (MPO) 수준을 측정합니다.
- 흉부 캐비티를 열고 20 mL의 인산염 완충식식염수(PBS)를 두 번 인산염 식염수(PBS)로 인퓨즈한 다음 췌장을 수집합니다. 24시간 동안 4% 파라포름알데히드 용액에 담가 보시면 됩니다. 일련의 알코올 농도에서 탈수하고 파라핀에 포함됩니다.
- 마이크로토메를 사용하여 5 μm 두께의 췌장 조직 섹션을 준비하십시오.
- 췌장의 조직학적 평가를 위해 H&E 염색을 수행합니다.
- 슈미트 외 30에서 제안된 기준에 따라 병리학 점수를 평가한다.
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Representative Results
위의 지시에 따라 약 40분의 평균 수술 기간을 얻었습니다. 마우스는 약간 비활성 상태였으며 각각 24시간, 48h 및 72h에서 약 0.5-1.75g, 0.85-1.85g 및 0.5-4.73g의 무게를 잃었습니다(그림 2).
수술 이완 시점부터 수술 후 24시간까지, 질병이 발달함에 따라 마우스는 비활성 상태가 되어 반응이 느리고 행동하였다.
대조군과 SAP 마우스의 생존율은 각각 100%(8/8) 및 72.7%(8/11)였으며, 72h 수술 후(그림 3)이었다.
H&E 염색(그림 4) 및 병리학 점수(그림 5)에 따르면 췌장 섹션에서 발생하며, 명백한 부종 (점수: 3.14 ± 0.51 대 0.10 ± 0.08), 염증 (점수: 1.41 ± 0.81 대 0), 및 괴사 (점수: 3.03 ± 0.77 대 0) 췌장 조직의 대조마우스에 비해 SAP 마우스에서 관찰 될 수 있었다. 한편, 두 마우스 그룹에서 출혈(점수: 0.125 ± 0.31 vs. 0)에서 큰 변화가 발견되지 않아 SAP 마우스의 총 병리학 점수가 크게 상승했습니다(점수: 7.72 ± 1.61 vs 0.10 ± 0.08).
더욱이, 대조생쥐에 비해 아밀라제([46,740.32 ± 12,801.30] U/L vs. [3,324.40 ± 753.66] U/L, p < 0.001), 리파제([545.02 ± 356]. [18.32 ± 25.22] U/L, p < 0.05), 췌장 및 폐 MPO (췌장: [5.18 ± 3.26] U/g vs. [0.71 ± 0.41] U/g, p < 0.05; 폐: [11.70 ± 1.31] U/g vs. [1.56 ± 0.45] U/g, p < 0.001)는 SAP 마우스(그림 6)에서 발견되었다.
또한, 대조생쥐와 비교하여, SAP 마우스는 다음과 같은 색인에 의해 도시된 바와 같이 손상된 간 및 신장 기능을 입증했습니다: ALT ([164.36 ± 47.66] U/L vs. [77.15 ± 31.06] U/L, p < 0.001), AST ([222.35 ± 82.13] U/L vs. [116.61 ± 64.79] U/L, p < 0.01), 혈액 우레아 질소(BUN) ([37.59 ± 16.36] mM vs[14.80 ± 3.7] p < 0.001) 및 크레아티닌([40.33 ± 11.53] μM vs. [28.66 ± 4.53] μM, p < 0.01) (그림 7).
그림 1. 비관 장학 덕트에 나트륨 taurocholate (TC)의 역행 주입 전후 마우스 췌장의 해부학 및 형태. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 2. 대조군(n =8) 및 중증 급성 췌장염(n=11) 마우스의 체중 변화의 시간 과정. 오류 막대는 표준 편차(SD)를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 3. 대조군(n=8) 및 중증 급성 췌장염(n=11) 마우스의 생존 곡선 모니터링. 파란색과 빨간색의 숫자는 각각 대조군 및 SAP 그룹의 특정 시점에서 살아남은 마우스의 수를 나타낸다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 4. 제어 및 심한 급성 췌장염 (SAP) 마우스에서 췌장 섹션의 조직 병리학. 검은 화살표는 염증 세포 침투를 나타내고, 붉은 화살표는 출혈을 나타내고, 검은 반전 삼각형은 아시나르 괴사를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 5. 히스토로지 점수. 관장학 점수 (부종 포함, 괴사, 염증, 출혈, 및 총 점수) 제어 및 심한 급성 췌장염 (SAP) 마우스에서 췌장 섹션의. 각 검정 점은 한 마우스의 해당 점수를 나타냅니다. ns: 중요하지 않음; **p < 0.01; p < 0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 6. 아밀라제및 리파제의 혈청평가 및 췌장 및 폐 골수페록시다제(MPO) 활성의 결정. 아밀라제, 리파제 및 췌장 및 폐 MPO의 상당히 증가 된 수준은 제어 마우스에 비해 SAP 마우스에서 발견되었다. 하나의 검정점은 하나의 마우스를 나타냅니다. 오류 막대는 표준 편차(SD)를 나타냅니다. *p < 0.05; p < 0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
그림 7. 간 기능 인덱스 (ALT: 알라닌 아미노 전달, 및 AST: 아미노 전달 제) 및 신장 기능 인덱스 (크레아티닌과 BUN: 혈액 우레아 질소), 제어 및 심각한 급성 췌장염 (SAP) 마우스. ALT, AST, BUN 및 크레아티닌의 상당히 증가 된 수준은 제어 마우스에 비해 SAP 마우스에서 발견되었다. 하나의 검정점은 하나의 마우스를 나타냅니다. 오류 막대는 표준 편차(SD)를 나타냅니다. *p < 0.05; **p < 0.01; p < 0.001. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.
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Discussion
TC 유도 SAP 모델은 우수한 연구 도구입니다. 이 연구에서 와 같이,이 모델은 특정 장치를 사용하지 않고 일반 실험실에서 매우 쉽게 실현됩니다. 조직학 및 생화학적 분석과 함께 사용될 경우 AP를 유도하고 평가하기 위한 비용-(저렴한 시약) 및 시간 절약(24h 시간 창) 접근법을 제공합니다. TC의 농도조정은 또한 SAP를 유도하기 위해 TC를 고용하여 마우스20에 SAP를 유도할 수 있는 가능성을 제공하며, 주요 차이점은 TC주입에 사용되었다. 더 정확한 주입 복용량을 제공할 수 있습니다.
우리의 경험에 따르면, 모델 설립의 수술 과정에서 가장 중요한 요인은 이중 성 덕트의 전체 노출, 마이크로 인젝터의 부드러운 천자, 비교적 일정한 속도로 biliopancreatic 덕트 및 췌장 덕트에 TC의 주입을 포함했다. 수술 중 다음 사항에주의를 기울여야 합니다. 첫째, 십이지장 괴사귀가 발생할 수있는 과도한 힘의 적용을 피하기 위해 부드럽게 꺼내야합니다. 이중 성덕의 개통은 십이지장성의 내부 가장자리를 따라 위치하고 있으며 (십이지장 유두라고도 함), 담즙 덕트는 이후에 위치 할 수 있습니다. 성공하면 이중 성 덕트를 형성하고 잎 모양의 췌장을 통과하는 흰색 십이지장 유두와 튜블을 식별 할 수 있어야합니다. 이중 성 덕트의 적절한 노출은 후속 절차를 용이하게해야합니다. 둘째, 편합사를 이용하여 supine 위치에 배치된 마우스의 왼쪽 아래쪽으로 십이지장족을 고정할 때 적당한 당김력을 적용하여 장력 손실 없이 이중핵증덕트를 곧게 펴야 한다. 과도하고 부족한 당기는 힘은 십이지장 벽의 찢어지고 담즙 덕트의 부적절한 노출을 초래할 수 있으며, 이는 후속 펑크에 부정적인 영향을 미칠 수 있습니다. 십이지장 동봉을 사용하여 왼쪽 아래쪽에 고정될 때 수직 각도가 매끄러운 구멍을 보장하는 것이 좋습니다. 그런 다음 천자 동안 천자 방향이 이중 성덕의 방향과 평행하게 되어 있는지 확인합니다. 구멍이 뚫을 때, 바늘 끝의 경사 평면은 십이지장 벽을 통과하고 그 후에 이중 질 경상관을 입력하기 위하여 아래쪽으로 지향되어야 합니다, 담즙관덕을 뚫지 않기 위하여 적당한 힘을 사용하는지 확인하십시오. 성공적인 펑크 후, 비관 증분 덕트를 입력 할 때 저항을 느껴서는 안되며, 침구 끝을 부드럽게 흔들 때 biliopancreatic 덕트 벽의 긴장을 느껴서는 안됩니다. 마지막으로, 절차 하는 동안, 십이지은 활동을 유지 하기 위해 따뜻한 정상적인 식염수와 촉촉한 유지 해야 합니다.
그러나 이 방법에는 몇 가지 제한 사항이 있습니다. 첫째, 재현성은 각 마우스로부터 TC에 대한 상이한 반응에 의해 영향을 받을 수 있다. 따라서 이러한 영향을 최소화하기 위해 각 마우스의 해당 결과를 쌍으로 비교할 수 있습니다. 둘째, 십이지장 유두의 부상은 천개 과정에서 일반적인 현상이며, 이는 급성 췌장염을 유발할 수 있습니다. 따라서, 이 모델링 방법을 이행하기 위하여 적당한 외과 기술을 개발하기 위하여 더 긴 훈련 시간이 필요할 지도 모릅니다. 또한 마우스를 적절한 크기로 유지하는 것이 수술 결과를 보장하는 데 도움이 될 수 있습니다.
이러한 제한에도 불구하고,이 모델은 AP를 유도하고 AP의 과정에서 새로운 치료와 가능한 분자 이벤트를 조사하기위한 현재까지 가장 널리 사용되고 가장 잘 특징적인 모델 중 하나입니다. 이전 연구에 따르면, TC를 통해 유도된 SAP는 또한 이 모델로 달성된 심각도가 인간 질환과 유사하고 쉽게 재현될 수 있기 때문에 표적 치료 평가에 적합하다고 설명되었다. Quercetin 개입은 TLR4/MyD88/p38 MAPK 및 내민성 망상 응력 (ERS) 활성화 (ERS)의 억제를 통해 이 SAP 모델에서 췌장 및 장막 병리학적 손상을 감쇠하는 것으로 보고되었다. 선택적 Orai1 채널 차단제인 CM4620의 투여는 이 SAP 모델의 심각도를 크게 감소시킬 수 있습니다. 트립시노겐 활성화, 아시나르 세포 사멸, NF-θB, 활성화된 T세포(NFAT) 활성화 및 염증 반응의 핵인자 로부터의 예방은 근본적인 메커니즘으로 작용하도록 하였다32. TC 이외에, 타우롤리토홀산 3-황산(TLCS)은 AP 유도에 자주 사용되는 또 다른 담즙산이다. 피터슨 외 33에 의해 검토된 바와 같이, 아시나르 세포에서 TLCS에 의해 유도된 높은 칼슘 이온 농도는 세포 내 미토콘드리아 ATP 생산뿐만 아니라 칼슘 이온 외세포증을 통해 췌장에 위치한 다른 세포(acinar, stellate 및 대식세포)에도 영향을 미칠 수 있습니다. 반면, TC는 periacinar stellate 세포에 미치는 영향을 통해 아시나르 세포에 간접적인 손상을 발휘할 수 있습니다.
따라서 TC 유도 SAP 모델은 AP의 발병에 대한 탁월한 통찰력을 제공하며 신약의 전임상 유효성을 검사하기 위한 매우 관련성이 높은 도구입니다. 더욱이, 이 모형은 AP 취급을 위한 치료에서 유래된 불쾌하고 예기치 않은 효력을 추가 평가하기 위하여 큰 동물에 적응될 수 있습니다.
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Disclosures
없음.
Acknowledgments
NCRCH [2020WSA01]의 번역 연구 보조금, 소주건강위원회(KJXW20200002)의 KJXW 과학교부금, 소주시 과학기술계획(SKY2021038 및 SKJY2021050), 장쑤고등교육기관(PAPD)의 우선학술프로그램 개발 보조금, 1차 연구사회개발계획(PAPD)을 지원한다.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.5% iodophor | Shanghai Likang Disinfectant | 310102 | 4 mL/mouse |
| 0.9% sodium chloride | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10019318 | 0.8 mL/mouse |
| 1% Pentobarbital sodium | Sigma | P3761 | 0.2 -0.25 mL/mouse |
| 25 μL flat tip Microliter syringe | Gaoge, Shanghai | A124019 | |
| 4% Paraformaldehyde | Beyotime, Nantong, China | P0099-500ml | |
| 5% sodium taurocholate (TC) | Aladdin | S100834-5g | 10 μL/SAP mouse |
| 6-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (1/2 circle) | Cheng-He | 20093 | |
| 75% alcohol | Sinopharm Group Co., Ltd. | 10009218 | 4 mL/mouse |
| 8-0 Sterile nylon microsuture with threaded needle (3/8 circle) | Cheng-He | 19064 | |
| ALT Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | ALT0012 | |
| Amylase Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AMY0012 | |
| Angled small bulldog clamp with 12 mm jaw (3 cm) | Cheng-He | HC-X022 | |
| aspen shavings or shreds for mouse bedding | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | VR03015 | |
| AST Activity Assay Kit | EPNK, Anhui, China | AST0012 | |
| Blood Urea Nitrogen (BUN) Assay Kit | EPNK, Anhui, China | BUN0011 | |
| C57BL/6 mouse | Beijing Vital River Laboratory Animal Technology | 213 | |
| Creatine Assay Kit | EPNK, Anhui, China | CRE0012 | |
| Feature microtome blade | Beyotime, Nantong, China | E0994 | |
| Hemostatic Forceps (9.5 cm, Curved) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | JC3901 | |
| Lipase Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A054-2-1 | |
| Microtome | Leica biosystem, Germany | RM2245 | |
| Mindray biochemistry analyzer | Mindray, Shenzhen, China | BS-420 | |
| MPO Assay Kit | Jiancheng, Nanjing, China | A044-1-1 | |
| Normal mouse chow | Trophic, Nantong, China | LAD 1000 | |
| Phosphate buffered saline | Beyotime, Nantong, China | C0221A | |
| Straight micro-bulldog clamp with 5 mm jaw (1.5 cm) | JZ, Shanghai Medical Instruments Co. Ltd. | W40130 | |
| Straight or curved forceps (11.0 cm) | Cheng-He | HC-X091A or HC-X090A | |
| Straight Scissors (10.0 cm) | Cheng-He, Ningbo, China | HC-J039102 | |
| Thermo Scientific Centrifuge | Thermo Scientific, USA | Multifuge X1R |
References
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